Kemia

Geenistä proteiiniin

Geenistä proteiiniin


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

MRNA

Lähetti-RNA (mRNA) käännetään kirjaimellisesti sanansaattajaksi, joka tuo "viestin" "valvontahuoneen" DNA:sta proteiinitehtaan ribosomiin. Koodaavan sekvenssin lisäksi mRNA sisältää myös säätelytoimintoja. Niiden toiminta on identtinen kaikissa soluissa, nimittäin, että niiden pitäisi pysyä solussa vain tietyn ajan, mutta prokaryoottien ja eukaryoottien mRNA:iden välillä on merkittäviä rakenteellisia eroja.

Prokaryootin mRNA

Heti kun mRNA poistuu RNA-polymeraasista edes osittain, ribosomit lukevat sen. RNA, joka edelleen kasvaa, transloituu ribosomeissa. Tämä kytketty transkriptio-translaatio on tärkeä säätelyilmiö.

Heti kun ribosomit ovat hitaampia kuin RNA-polymeraasi (kolme uutta nukleotidia tulisi sisällyttää samaan aikaan toisen aminohapon kanssa), RNA-polymeraasin ja ribosomin välinen kontakti katkeaa. Nyt RNA:ta ei enää peitä proteiineja ja ribonukleaasit hajottavat sen. Tällä tavalla solu voi reagoida hyvin nopeasti ravinnon vähenemiseen. Ladattujen tRNA:iden puuttuessa muita proteiineja, mukaan lukien mRNA, ei tarvita.

Vaikka ribosomi tunnistaa mRNA:n ilman spesifisiä signaalirakenteita, aloituskodonin tunnistamiseen tarvitaan erityinen sekvenssi. Tätä kohtaa kutsutaan ribosomin sitoutumispaikaksi. Se on jaettu aloituskodoniin ATG (GTG, TTG) ja niin kutsuttuun Shine-Dalgarno-sekvenssiin. Shine-Dalgarno-sekvenssi on komplementaarinen 16S-RNA:n 3'-päälle. Kuten kuvassa 1 näkyy, 3'-pää sisältää lyhyen alueen, joka koostuu kokonaan pyrimidiineista. Koska guanosiini sitoutuu myös uridiiniin, käytännöllisesti katsoen mikä tahansa oikealla etäisyydellä oleva oligopuriinisekvenssi riittää Shine-Dalgarno-sekvenssiksi. Parempien emäsparien muodostuminen johtaa korkeampaan ekspressioon; liian hyvä emäsparittelu puolestaan ​​vähentää ilmentymisnopeutta.

Huomautus
Prokaryoottien mRNA voi koodata useita geenejä, joten aloitussekvenssiä on vain yksi, mutta ribosomin sitoutumiskohtia useita. Tiedetään, että vierekkäiset ribosomin sitoutumiskohdat ovat ensisijaisesti ribosomin käytössä, joka on kääntänyt johtavan geenin. Tällä tavalla solu takaa tasapainoisen suhteen alayksiköitä proteiineissa, joissa on eri alayksiköitä suhteessa 1:1 (esim. ribosomissa).

Eukaryoottinen mRNA

Kypsä eukaryoottinen mRNA tuotetaan solun tumassa. 5'-pää, jossa on 5'-trifosfaatti, muunnetaan erityisillä entsyymeillä (engl. korkki). "Korkkeen" rakenne on esitetty kuvassa 2.

"Cap" luo toisen 3'-pään. Erikoisentsyymit muodostavat terminaalisesta 5'-trifosfaatista ja GTP:stä sekoitettua 5', 5'-trifosfaattia, jota modifioidaan metyloimalla terminaalinen guanosiini asemassa 7 ja osittain myös saman guanosiinin 2'-hydroksiryhmät ja/ tai viereiset nukleotidit (katso yksityiskohdat kuvassa 2). Ilmeisesti tätä rakennetta käytetään myös ribosomin tunnistamiseen lähetti-RNA:ksi

mRNA-synteesin lopetus on aina tekijäriippuvainen. Nämä tekijät ovat samankaltaisia ​​kuin bakteerien Rho-tekijät.. Useimmiten RNA imeytyy erityisiin tekijöihin sekvenssin läheisyydestä ennen kuin RNA-polymeraasi saavuttaa vastaavat sekvenssit. Polyadenylaatiosignaali katkeaa. Signaali on AAUAAA (AUUAAA) -sekvenssi. Sen jälkeen 12-16 nukleotidia leikataan pois ja määräämättömän pituiset adenosiinit kiinnitetään. Tämä niin kutsuttu poly(A)-häntä on osa kaikkia eukaryoottisia mRNA:ita ja toimii ilmeisesti suojana RNAaseilta.

Huomautus
Histoni-mRNA on ainoa, joka ei ole polyadenyloitu. Tämä tärkeä toiminto säätelee solua erikseen.

Poly(A)-häntä on osoittautunut erittäin edulliseksi eukaryoottigeenien biokemiallisessa karakterisoinnissa. Affiniteettikromatografian avulla oligo-dT:n kautta, joka on enimmäkseen kytketty selluloosaan tai agaroosiin kantajamatriisina, kaikki mRNA:t voidaan eristää selektiivisesti. mRNA voidaan transkriptoida DNA:ksi käänteiskopioijaentsyymin avulla. Kloonauksen jälkeen koodaussekvenssi voidaan siten määrittää.

Huomio: kokeellinen työ mRNA:n kanssa vaatii huolellista puhtautta. Kaikkialla on ribonukleaaseja, jotka hajottavat mRNA:n ikään kuin soluja avattaessa. Vaikka pystyt luonnehtimaan 3'-pään nopeasti poly(A)-hännällä, voi kestää kauan saada klooneja, joissa on täydellinen sekvenssi (ns. "täyspitkät kloonit").



Kommentit:

  1. Faukinos

    Sanoit oikein :)

  2. Corbenic

    the phrase Excellent

  3. Xanthus

    we can say, this exception :)

  4. Nebar

    Miten voi olla viranomaista vastaan



Kirjoittaa viestin